Get Adobe Flash player

ВПЛИВ ЛЕГКОЇ ГІПОТЕРМІЇ НА ЗДАТНІСТЬ СТРОМАЛЬНИХ КЛІТИН КІСТКОВОГО МОЗКУ ЩУРІВ ФОРМУВАТИ КОЛОНІЇ IN VITRO

Автор: Малишкіна С.В., Пошелок Д.М., Нікольченко О.А., Вишнякова І.В., Самойлова К.М.

Сторінки: 491-498

Анотація

        

Мета: дослідити invitro колонієутворювальну здатність стромальних клітин кісткового мозку у щурів різного віку після легкої гіпотермії, індукованої холодовим впливом. В роботі вивчені цитологічні показники здатності стромальних клітин кісткового мозку формувати колонії при культивуванні – кількість та площа клітинних колоній, морфологічна характеристика стану культивованих клітин. Кістковий мозок білих щурів 6- та 24-місячного віку отримували зі стегнових та великогомілкових кісток на 7 та 28 добу після індукованої легкої гіпотермії (тварини 5 діб перебували у холодовій камері при температурі −20 °С по 5 годин на добу). Клітини кісткового мозку висівали у пластикові флакони (Falcon) із розрахунку 1,5×106 клітин на 1 см2 та культивували впродовж 12 діб. Поживне середовище замінювали кожні три доби. Наприкінці культивування клітини промивали, фіксували та забарвлювали азур-еозином за Романовським.

Встановлено, що гіпотермія пригнічує проліферативну активність культивованих клітин та їхню здатність утворювати колонії. В культурі клітин, отриманих у молодих тварин на 7 добу після гіпотермії, встановлені менші показники кількості та площі утворених колоній, ніж у контрольних культурах. По периферії колоній виявлені клітини з деструктивними змінами (вакуолізація цитоплазми, пікноз ядра). В дослідних культурах клітин щурів старечого віку формування колоній не зафіксовано (клітини розташовані поодиноко або невеликими кластерами). На 28 добупісля гіпотермії різниця за досліджуваними показниками між дослідними та контрольними культурами клітин і молодих, і старих тварин скоротилася у порівнянні з 7 добою. Це свідчить про відновні процеси, які перебігають у кістковому мозку після гіпотермії, але у тварин старечого віку вони менш виражені, бо і на цей термін у дослідних культурах клітин старих щурів показники кількості та площі утворених колоній були найменші.

Ключові слова: культура клітин, кістковий мозок, клітинні колонії, гіпотермія, щури.

Ця електронна адреса захищена від спам-ботів. вам потрібно увімкнути JavaScript, щоб побачити її.

Список літератури

  1. Babiichuk VG. [Quantitative estimation of antigen-specific cells in human blood after rhythmic cold effect]. Ukr. Problems of Cryobiology. 2009; 19(2): 143-153.
  2. Kolinko YaO. [Condition of conductor system and microcirculation of rat sciatic nerve on the seventh day after the general deep hypothermia]. Ukrainskyi morfolohіchnyi almanakh. 2010; 8(2): 91-94.
  3. Baylor K, Stecker 2009; 59(1): 12-18. doi:10.1016/j.cryobiol.2009.01.006
  4. Bennet L, Roelfsema V, George S, Dean JM, Emerald BS, Gunn AJ. The effect of cerebral hypothermia on white and grey matter injury induced by severe hypoxia in preterm fetal sheep. 2007; 578(2): 491-506. doi:
  5. Duebener LF, Hagino I, Sakamoto T, Mime LB, Stamm C,Zurakowski D, Schäfers H-J, Jonas
  6. Rodionova NV. Tsytolohichnimekhanizmyperebudovukistkakhpryhipokineziitamikrohravitatsii [Cytologicalmechanismsrebuilding in the bones under hypokinesia and microgravity]. Kyiv: Naukova Dumka Publ., 2006. 240 p. (In
  7. Вuckwalter J, Glimcher M, Cooper R, Recker R. Bone biology. J. Bone Jоint Surg. 1995; 77-A(8): 1256-1275.
  8. Robling AG, Castillo AB, Turner CH. Biomechanical and molecular regulation of bone remodeling. Annu. Rev. Biomed. Eng. 2006; 8: 455-498. doi:
  9. Poshelok DM, Malyshkina SV. [Structural organization of compact bone after general hypothermia]. Ukr. Tavricheskiy mediko-biologicheskiy vestnik. 2013; 16(1 Pt 1): 197-201.
  10. Gololobov VG, Deev RV. [Stromal stem cells and osteoblastic cellular differon]. Rus. Morphology. 2003; 123(1): 9-19.
  11. Deev RV, Tsupkina NV, Gololobov VG, Nikolaenko NS, Ivanov DYe, Dulaev AK, Pinaev GP. [The influence of transplanted culture of bone marrow stromal cells on reparative osteohistogenesis in parietal bone defect]. Rus. Cytology. 2008; 50(4): 293-301.
  12. Shalimov VA. Nekotorie osobennosti mezhkletochnykh tsitoplazmo-tsitoplazmaticheskikh, yaderno-tsitoplazmaticheskikh i yaderno-yadernykh soedinenii v kostnom mozge kontrolnykh krys, podvergaiushchikhsia vozdeystviiu hipodinamii [Some features of cell-cell cytoplasm, cytoplasmic, nuclear-cytoplasmic and nuclear-nuclear compounds in bone marrow control rats exposed to hypodynamia]. Kiev: Znanie Ukrainy Publ., 2004. 28 p. (In
  13. Rodionova NV, Bogdanovich LV. [In vitro marrow stromal cells colonies after modeled hypokynesia in rats]. Ukrainskyi morfolohіchnyialmanakh. 2005; 1: 53-55.
  14. Gorskaya YuF, Latsinik NV, Shuklina YeYu, Nesterenko VG. [Age changes in the population of stromal
  15. Lebedinskaya OV, Gorskaya YuF, Shuklina YeYu, Latsinik NV, Nesterenko VG. [Age changes in the numbers of stromal precursor cells in the bone marrow of animals]. Rus. Morphology. 2004; 126(6): 46-49.
  16. Kovalenko VN, Lysenko IV, Panchenko LM. [Culture of stem stromal marrow cells as a model for the study of direct influence of pharmacological medicines at osteoarthosis]. Ukrainskyi revmatolohichnyi zhurnal. 2006; 25(3): 45-48.
  17. Gayko HV, Podgaetskiy VM, Sulima AN, Osadchuk TI. [Effect of different types of cementless prosthesis covering on activity of stem bone marrow stromal cells in patients with osteoarthritis of the hip]. Kz. Traumatology and orthopedics. 2014; 3-4: 178-179. (InRussian).
  18. Tuli JS, Gilbert RC. Hypothermia in animals. Retrieved from: http://www.hypothermia.org/animalhypo.htm
  19. Shchehelska ОА., Mykulynskyi YuYu, Omelchenko ОА, Kulshyn VYe, Khvysuk OM, Demyn YuA, Popsuishapka OK, Mamontov IM. Tekhnolohii vydilennia klityn stormy kistkovoho mozku liudyny, rozmnozhennia in vitro ta induktsiia v nervovi klityny ta osteoblasty [The technologies of the selection of human stromal bone marrow cells, reproduction in vitro and induction in nerve cells and osteoblasts]. Guidelines. Kharkiv, 2004. 16 p. (In
  20. D’Ippolito G, Schiller PC, Ricordi C, Roos BA,Howard GA. Age-related osteogenic potential of mesenchymal stromal stem cells from human vertebral bone marrow. 1999; 14(7): 1115-1122. doi:
  21. Nishida S, Endo N, Yamagiwa H, Tanizawa T,Takahashi HE. Number of osteoprogenitor cells in human bone marrow markedly decreases after skeletal maturation. 1999; 17(3): 171-177. doi:
  22. Ilyina VK, Prokhorova YeV. [Cellular genetic characteristics of bone marrow stromal cells in various forms of osteoporosis]. Proceedings of the 3d Russian Symposium on Osteoporosis. St.Petersburg, 2000, p. 65. (InRussian).